ITH. Chudinova, V.A. Platonov, A.V. Alexandrova, S.N. Elansky
Le déanaí, léiríodh go bhfuil an fungas ascomycete Ilyonectria crassa in ann tiúbair prátaí a ionsaí. Ba í an saothar seo an chéad cheann a rinne anailís ar shaintréithe bitheolaíocha agus ar fhriotaíocht d’fhungaicídí áirithe den phór I. crassa atá scoite amach ó phrátaí. Bhí seichimh na réigiún speiceas-shonrach den phór “prátaí” ag an am céanna leis na cinn a fuarthas roimhe seo le haghaidh fungais scoite amach ó fhréamhacha narcissus, ginseng, Crann Creathach agus feá, bolgáin lile agus duilleoga tiúilipí. Réir dealraimh, is féidir go leor plandaí fiáine agus gairdín a bheith cúlchistí do I. crassa. An brú staidéar ionfhabhtaithe slices trátaí agus prátaí, ach ní raibh infect torthaí trátaí iomlán nó tiúbair prátaí slán. Léiríonn sé seo gur parasite créachta é I. crassa. Léirigh meastóireacht ar fhriotaíocht in aghaidh fludioxonil, difenoconazole agus azoxystrobin ar mheán cothaitheach éifeachtacht ard na ndrugaí seo.
Bhí an táscaire EC50 (tiúchan fungaicíde a mhoillíonn 2 uair ráta fáis gathacha an choilíneachta i gcoibhneas le rialú neamh-fhungaicídí) comhionann le 0.4; 7.4 agus 4 mg/l, faoi seach. Ba cheart an fhéidearthacht galar de bharr I. crassa a fhorbairt a chur san áireamh nuair a bhíonn tiúbair prátaí á measúnú go fíteapateolaíoch agus ag forbairt bearta cosanta plandaí.
Mar thoradh ar fhorbairt miocrorgánaigh phytopathogenic tá caillteanais ard ag gach céim de shaothrú agus de stóráil prátaí. Agus bearta cosanta á bpleanáil, mar riail, cuirtear pataiginí aitheanta san áireamh, mar shampla speicis den ghéine Alternaria, Fusarium, Phoma, Helminthosporium, Colletotrichum, Phytophthora, etc., áfach, le blianta beaga anuas, tá tuairiscí níos mó agus níos mó le feiceáil faoi chuma na miocrorgánach fíteapatóigineach nua ar phrátaí. Tá droch-staidéar déanta ar a mbitheolaíocht, níl anaithnid ar éifeachtacht na múiscnimheanna a úsáidtear ar phrátaí ina gcoinne, agus níor forbraíodh modhanna diagnóiseacha. Nuair a fhorbraítear iad en masse, tá siad in ann damáiste suntasach a dhéanamh don bharr prátaí. Ceann de na miocrorgánaigh seo is ea an fungas ascomycete Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous, a d’aimsigh na húdair ar thiúbair prátaí den chéad uair (Chudinova et al., 2019).
Cuireann an páipéar seo i láthair torthaí anailíse ar an strain I. crassa scoite ó thiúbair prátaí. Rinneadh staidéar ar mhoirfeolaíocht na gcoilíneachtaí agus ar struchtúir mhiocéileacha I. crassa, ar sheichimh núicléitíde de chodanna DNA a bhaineann go sonrach le speicis, ar ghréine do phrátaí agus ar thrátaí, agus ar fhriotaíocht in aghaidh roinnt múiscnimh coitianta.
abhair agus modhanna
Is é an brú a úsáidtear sa saothar seo ná I. crassa 18KSuPT2, scoite amach in 2018 ó thiúbair prátaí ionfhabhtaithe a fhástar i réigiún Kostroma. Chuir lobhadh tirim isteach ar an tiúbair le cuas clúdaithe le pór donn éadrom. Ag baint úsáide as snáthaid steiriúil díscartha, aistríodh an pór an pór fungais isteach i mias Petri le meán agar (wort beorach 10%, agar 1.5%, peinicillin 1000 aonad/ml). Goradh na miasa sa dorchadas ag 24°C.
Le haghaidh grianghrafadóireacht, rinneadh measúnú ar mhéid agus ar mhoirfeolaíocht na spóir agus na n-orgán spóireála, baineadh úsáid as micreascóp solais Leica DM2500 le ceamara digiteach ICC50 HD agus micreascóp déshúileach Leica M80 le ceamara digiteach IC80HD (Leica Microsystems, an Ghearmáin).
Chun DNA a leithlisiú, fásadh an pór fungach i meán piseanna leachtacha, ansin reoite i nítrigin leachtach, homogenized, gortha i maolán CTAB, íonaithe le clóraform, agus nite faoi dhó le 2% alcól.
Déantar cur síos mionsonraithe ar an modh eastósctha DNA san alt ag Kutuzova et al. (2017).
Chun céannacht speiceas a chinneadh trí mhodhanna móilíneacha agus chun comparáid a dhéanamh le cineálacha aitheanta eile de I. crassa, rinneadh PCR le primers a cheadaigh aimpliú ar réigiúin DNA speiceas-shonracha: ITS1-5,8S-ITS2 (primers ITS5/ITS4, White et al., 1990), réigiúin de ghéinte b -tubulin (Bt2a/Bt2b, Glass agus Donaldson, 1995) agus fachtóir fadaithe aistriúcháin 1α (tef1α) (primers EF1-728F/EF1-986R, Carbone and Kohn, 1999). Baineadh amplicons den fhad riachtanach as an glóthach ag baint úsáide as an trealamh Glanta ó Evrogen. Rinneadh seicheamhú ar na réigiúin aimplithe trí úsáid a bhaint as Kit Seicheamhaithe Rothaíochta BigDye®Terminator v3.1 (Bithchórais Fheidhmeach, CA, SAM) ar sheicheamhóir uathoibrithe Bithchórais Fheidhmeach 3730 xl (Applied Biosystems, CA, USA). Úsáideadh na seichimh núicléitíde a fuarthas chun meaits a chuardach i mbunachar sonraí GenBank d’Ionad Náisiúnta um Fhaisnéis Biteicneolaíochta SAM (NCBI). Rinneadh anailís phylogenetic ag baint úsáide as an gclár MEGA 6 (Tamura et al., 2013).
Rinneadh cinneadh virulence ar thorthaí iomlána glasa de trátaí mór-fruited (éagsúlacht Dubrava) agus tiúbair prátaí (éagsúlacht Gala). Ina theannta sin, chun insamhail damáiste do thorthaí agus tiúbair damáiste, baineadh úsáid as slices de na torthaí agus tiúbair céanna. Cuireadh slices tiúbair i ndlísheomraí tais, a bhí miasa Petri le páipéar scagaire fliuch ag bun an leathanaigh. Cuireadh sleamhnán gloine ar an bpáipéar, agus ar a seal, cuireadh slices de thiúbair nó torthaí. Cuireadh tiúbair agus torthaí iomlána i gcoimeádáin freisin le scagpháipéar fliuch ag an mbun. Cuireadh píosa agair (5 × 5 mm) le hífí fungacha i lár an tslis (nó ar dhromchla slán an tiúbair nó na dtorthaí) le hífí fungasach tar éis 5 lá saothraithe ar wort agar.
Rinneadh measúnú ar fhriotaíocht tréithchineálacha fungacha in aghaidh fungaicídí i gcoinníollacha saotharlainne ar mheán cothaitheach agar. Rinneamar staidéar ar an so-ghabhálacht do na drugaí fungicídeacha Maxim, KS (comhábhar gníomhach fludioxonil, 25 g/l), Quadris, KS (azoxystrobin 250 g/l), Skor, CE (difenoconazole 250 g/l) (Catalóg Stáit ..., 2020). ). Rinneadh an mheastóireacht i miasa Petri ar mheán wort-agar agus cuireadh na drugaí a ndearnadh staidéar orthu ag tiúchan na substainte gníomhaí de 0.1; 1; 10 ppm (mg/l) (le haghaidh fludioxonil agus difenoconazole), 1; 10; 100 ppm (le haghaidh azoxystrobin) agus ar mheán gan fungaicíd (rialú). Cuireadh an fungaicíd leis an leáite agus fuaraithe go meán 60 ° C, agus ina dhiaidh sin doirteadh an meán isteach i miasa Petri. Cuireadh bloc agar le pór fungais i lár mias Petri agus saothraíodh é ag teocht 24 °C sa dorchadas. Tar éis 7 lá goir, tomhaiseadh trastomhais na gcoilíneachtaí i dhá threo ingearach lena chéile; meánaíodh na torthaí tomhais do gach coilíneacht. Rinneadh trialacha faoi thrí. Bunaithe ar thorthaí na tástála, ríomhadh an t-innéacs EC50, comhionann leis an tiúchan fungaicíd a leath ráta fáis gathacha an choilíneachta i gcoibhneas leis an rialú neamh-fhungaicídí.
Torthaí agus plé
Ar miasa Petri le wort agar, bhunaigh an fungas coilíneachtaí le pór bán scagach. An mheán faoin pór iompaithe dearg-donn. Nuair a thriomaigh an meánmhéid, foirmíodh an fungas dhá chineál spóir ar chonidiophores amháin agus iad siúd comhiomlánaithe i sporodochium beag. Tá Macroconidia fadaithe, sorcóireach, le 27.2-23.2 septa, meánfhad 32.2 µm le raon luachanna ó 4.9 go 1 µm, leithead - suas go dtí 14.3 µm (Fíor 10.3). Is é meánfhad na microconidia ná 18.1 µm le raon luachanna ó 4.0 go 2012 µm, leithead - suas le XNUMX µm. Tagann gach carachtar macra agus micrea-mhoirfeolaíoch faoi raon éagsúlachta an speicis Ilyonectria crassa (Cabral et al., XNUMX).
Bhí seichimh na réigiún DNA speiceas-shonrach (ITS, b-tubulin, TEF 1α) go hiomlán ag an am céanna leis na sraitheanna de na cineálacha I. crassa a ndearnamar staidéar orthu roimhe seo (Chudinova et al., 2019, Tábla 1). D'fhonn staidéar a dhéanamh ar leitheadúlacht I. crassa i réigiúin eile agus anailís a dhéanamh ar speictream na mbarr a raibh tionchar orthu, rinneadh anailís ar sheichimh DNA den chineál céanna i mbunachar sonraí GenBank (Tábla 1). Bhí an forluí sa raon ó 86 go 100%. Bhí na seichimh i ngach ceann de na trí réigiún DNA den phór “prátaí” de I. crassa comhionann leis na sraitheanna de chineálacha scoite amach ó bholgáin lile agus fréamhacha narcissus san Ísiltír agus ó fhréamh ginseng i gCeanada. Ní rabhamar in ann teacht ar aon tréithchineálacha I. crassa eile leis na trí sheichimh chosúla a ndearnadh anailís orthu i mbunachair shonraí oscailte. Mar sin féin, léirigh anailís ar sheichimh thaiscthe ITS agus b-tubulin láithreacht I. crassa ar dhuilleoga tiúilipí sa RA. Aithníodh fungais a bhfuil seicheamh ITS comhchosúil acu agus anailís á déanamh ar mhíceabiota fréamhacha Crann Creathach i gCeanada agus ar feá san Iodáil, agus ar thiúbair phrátaí san Araib Shádach (Tábla 1). Léiríonn torthaí an staidéir seo go bhfuil dáileadh domhanda ag I. crassa agus go bhfuil sé in ann speicis éagsúla plandaí a ionsaí.
Nuair a bhí an pataigineacht ar slisní trátaí agus prátaí á chinneadh ar lá 5, shroich trastomhas an lesion 1.5 cm.. Ag an am céanna, níor ionfhabhtaigh an brú a ndearnadh staidéar air torthaí trátaí iomlána nó tiúbair prátaí slán. Mar sin féin, breathnaíodh damáiste do na seipil ar thrátaí. Chun an fhéidearthacht éillithe a eisiamh, rinneadh aonróg fungasach a leithlisiú i gcultúr íon ón pór a d'fhorbair ar slice de tiúbair prátaí. Bhí sé go hiomlán comhionann le brú na dtuismitheoirí. I. crassa dealraitheach a bheith ina parasite créachta.
Is féidir le cóireáil réamhphlandála tiúbair síolta le múiscnimheanna forbairt galair ar phlandaí a laghdú le linn an tséasúir atá ag fás. Chun múiscnimheanna éifeachtacha a roghnú, tá sé tábhachtach a mheas cé na cinn atá éifeachtach i gcoinne I. crassa. An obair staidéar a úsáidtear go forleathan comhábhair ghníomhacha fungaicídí - fludioxonil, azoxystrobin, difenoconazole. Tá fludioxonil mar chuid de roinnt ullmhóidí measctha a úsáidtear chun síolta agus tiúbair síolta a chóireáil roimh phlandáil. Úsáidtear fludioxonil (Maxim) freisin chun tiúbair síolta a chóireáil sula ndéantar iad a stóráil. Tá Difenoconazole agus azoxystrobin san áireamh freisin i roinnt ullmhóidí a úsáidtear chun ábhar síolta a phróiseáil, chomh maith le hullmhúcháin atá beartaithe chun plandaí fásúla a phróiseáil (Catalóg Stáit..., 2020).
Rinneadh staidéar ar ráta fáis I. crassa ar mheáin (Fíor 2) le tiúchain éagsúla de chomhábhair ghníomhacha: fludioxonil (EC50 = 0.4 ppm), azoxystrobin (EC50 = 4 ppm) agus difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (Tábla 2) . Is féidir na drugaí seo a mheas an-éifeachtach i gcoinne I. crassa, ós rud é go bhfuil a EC50 i bhfad níos ísle ná an tiúchan drugaí molta sa sreabhach oibre a úsáidtear chun tiúbair a chóireáil. De réir an Chatalóg Stáit... (2020), tá an tiúchan fludioxonil sa leacht chun tiúbair prátaí a chóireáil idir 500 agus 1000 ppm, azoxystrobin (sa leacht chun bun an choire a chóireáil) - 3750-9375 ppm, difenoconazole (sa leacht chun plandaí fásúla a chóireáil) – 187.5–625 csm.
Tábla 1. Cosúlacht seicheamháin idir seichimh speiceas-shonracha de phéine 18KSuPT2 agus tréithchineálacha Ilyonectria crassa atá ar fáil i mbunachar sonraí Genbank
Strain | Gléasra óstach, áit eisfhearadh | Uimhreacha seicheamh i dtaisce i GenBank, céatadán de chosúlachtaí | Nasc | ||
ITS | β-tubulin | TEF 1α | |||
17KSPT1agus 18KSuPT2 | Tiúbair prátaí, réigiún Kostroma. | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al., 2019, an obair seo |
CBS 158/31 | Fréamhacha Narcissus, an Ísiltír | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al., 2012 |
CBS 139/30 | bolgán Lily, an Ísiltír | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Fréamh ginseng, Ceanada | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735/725 99.6 |
|
RHS235138 | Duilleog tiúilip, an Ríocht Aontaithe | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | Denton, Denton, 2014 |
MT294410 | Fréamhacha Crann Creathach, Ceanada | MT294410 100 | ND | ND | Ramsfield et al., 2020 |
ER1937 | Buc, an Iodáil | KR019363 99.65 | ND | ND | Tizzani, Haegi, Motta. Aighneacht dhíreach |
KAUF19 | Tiúbair prátaí, an Araib Shádach | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbawy, 2013 |
ND = nár thaisceadh
Tábla 2. Friotaíocht Ilyonectria crassa i gcoinne múiscnimheanna
(substaint ghníomhach) | EC50, ppm | ||||
Lá 3 | Lá 5 | Lá 7 | |||
Rialú | 17 2 ± | 33 5 ± | 47 3 ± | ||
Quadris, KS (fzoxystrobin) | 18 1 ± | 34 2 ± | 48 2 ± | ||
11 1 ± | 11 1 ± | 12 1 ± | |||
11 1 ± | 11 1 ± | 12 1 ± | |||
Maxim, KS (fludioxonil) | 16 1 ± | 28 2 ± | 48 2 ± | ||
7 1 ± | 13 3 ± | 19 4 ± | |||
5 1 ± | 12 1 ± | 17 5 ± | |||
Scór, EC (difenoconazole) | 18 1 ± | 35 2 ± | 48 1 ± | ||
11 1 ± | 24 3 ± | 35 4 ± | |||
11 1 ± | 13 1 ± | 17 3 ± |
Inár gcuid oibre, scoiteadh strainsí I. crassa ó thiúbair prátaí i réigiúin Kostroma agus Moscó (Chudinova et al., 2019). Aithníodh céatadán ard dtréithchineálacha fungacha le sraitheanna ITS comhionann le I. crassa nuair a rinneadh anailís ar mhíceabiota tiúbair prátaí san Araib Shádach (Gashgari agus Gherbawy, 2013). De réir dealraimh, níl I. crassa chomh tearc ar phrátaí agus a d’fhéadfadh sé a bheith cosúil. Léirigh ár dturgnaimh go bhféadfadh an fungas torthaí trátaí damáiste a ionfhabhtú. Tá sé ar eolas ón litríocht go bhfuil I. crassa in ann forbairt go saprotrófach san ithir (Moll et al., 2016), agus freisin ionfhabhtú a dhéanamh ar raon leathan plandaí, fiú iad siúd atá i bhfad i gcéin i dtéarmaí tacsanomaíoch mar chromchinn, lilies, ginseng, Crann Creathach, agus feá (Tábla 1). Réir dealraimh, is féidir go leor plandaí fiáine agus gairdín a bheith cúlchistí do I. crassa. Léiríonn an méid thuas, agus bearta cosanta á bhforbairt, is gá an fhéidearthacht go ndéanfaidh an fungas seo damáiste do thiúbair prátaí a chur san áireamh. Léirigh ullmhóidí a úsáidtear go forleathan chun tiúbair prátaí a chóireáil, ina bhfuil fludioxonil, azoxystrobin agus difenoconazole, éifeachtacht ard fungaicídeach i gcoinne I. crassa.
Thacaigh Fondúireacht na Rúise um Thaighde Bunúsach leis an obair (deontas Uimh. 20-016-00139).
Foilsíodh an t-alt san iris “Bulletin of Plant Protection”, 2020, 103(3)